梵蒂岡博物院是世界上最古老的博物館群, 在羅馬圣彼得教堂北面, 建於公元５ 世紀末期．原為教皇宮廷, １７ 世紀曾利用部分建筑陳列收藏品, 后改為博物院．總面積５.５ 萬平方米, 共有大小展廳、展室和房間１４００ 多個．由收藏歷代教皇及教皇宮廷的藝術品、工藝品、與基督教有關的財寶的博物館和著名教堂組成．
梵蒂岡博物院是一個總稱, 其實院中有館, 館中有室, 分為１２ 個不同類型的陳列館和５ 個藝術長廊, 全稱為＂梵蒂岡博物館和藝術陳列館＂．其中有世界聞名的西斯廷小教堂, 有文藝復興時期藝術三杰之一拉斐爾的作品陳列館．這個藝術寶庫, 收藏的古今稀世文物與藝術珍品, 堪與倫敦大英博物館和巴黎盧浮宮相媲美．
庇護—克萊孟特博物館, 陳列有各種雕塑作品, 其中有公元２ 世紀的名雕, 太陽神阿波羅和９ 位女神石像．女神體態豐盈, 或坐或立, 或舞或躍, 各執樂器, 代表各藝術流派．館內有一座殘石像, 頭顱、兩臂、雙膝皆缺, 僅存大段軀干, 但雕刻精湛, 虬筋突出, 身體結構完美, 傳說是大力士赫拉克勒斯石像．據說米開朗基羅對之傾慕備至, 曾反復研究, 自稱是殘像的忠實信徒．動物雕塑廳猶如一座天然動物園, 鷹、獅、犬、鳥等飛禽走獸, 騰翔竄躍, 千姿百態．
藝術長廊上的壁畫、穹頂畫、鑲嵌畫、掛毯畫如錦似繡, 絢麗繽紛．其中, 毛毯刺繡廊掛著繡有耶穌生平事跡的１９ 幅華麗的壁毯；地圖廊４０ 幅鮮艷悅目的圖志描繪了意大利各城市和沿海島嶼的地形圖解, 它們出自１６ 世紀數學家、天文學家和建筑師伊格拉齊奧·旦丁的手筆, 被認為是當時地理上最重要的文獻．
繪畫館里有意大利各派名畫師的畫室或陳列室, 陳列著他們的代表作．其中, 拉斐爾的畫室, 是該館最大的陳列室．他於１５０８～１５１８ 年為梵蒂岡作壁畫１０ 年, 壁畫的總稱是《教權的建立和鞏固》, 在宗教題材中注入人文主義內容, 以現實的手法展現有血有肉的世俗生活, 成為梵蒂岡博物院的又一精華．在簽印廳內的右壁上, 是拉斐爾著名的壁畫《辯論會》, 畫中描繪的是古代哲人智者在沉思默想和交談辯論的形象．對面墻壁上是另一幅著名壁畫《雅典學院》, 表現了一群古希臘哲學家的聚會, 背景是明朗寬敞的古代建筑, 拱門外是大哲學家蘇格拉底和柏拉圖, 右下方是幾何學家歐幾里德正在躬身繪制幾何圖形, 形象各異, 自然生動, 體現了文藝復興時期特有的風格．
在梵蒂岡博物院中, 最吸引人的還當屬西斯廷教堂．它原是羅馬教皇的私用經堂, 長４０.５ 米, 寬１３.３ 米, 高２０.７ 米, 以擁有文藝復興時期的藝術大師米開朗基羅繪制的《創世紀》和《末日的審判》兩幅壁畫而聞名於世．
《創世紀》是西斯廷教堂天花板上的天頂畫, 面積為３００ 平方米, 由９幅中心畫面組成, 是米開朗基羅根據《舊約全書》中的創世紀篇故事, 從１５０８到１５１２ 年, 利用４ 年時間仰躺在一個２０ 多米高的腳手架上畫成的．畫中有天使、預言家、女巫、神甫等３４０ 多個裸體男女, 體態豐盈, 神情逼真, 是畫家想象中的各種英雄和巨人的匯集．他們共同構成了一幅無與倫比的絕代佳作．
《末日的審判》是米開朗基羅在西斯廷教堂祭壇后面山墻上利用６ 年時間繪制成的又一力作．該畫高２０ 米, 寬１０ 米, 是世界上最復雜和最大型的壁畫．在畫中, 米開朗基羅抒發了自己的愛憎感情, 畫面層次分明, 筆觸豪放悲憤, 氣勢感人, 成為梵蒂岡博物院的一顆永放光芒的藝術明珠．
此外, 梵蒂岡博物院還有異教徒考古博物館；收藏有關基督教的金屬工藝品、玻璃器、象牙雕刻等的基督教美術館；及世俗博物館、歷史博物館、格列高利、埃及博物館和傳教士博物館等．圖書館由１５ 世紀尼古拉五世創建, 現藏５０ 余萬冊手稿和善本, 是世界著名的收藏早期手抄本和古版本的圖書館．
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