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盤點ELSD總結

2024-07-10

盤點ELSD總結

  一、蒸發光散射檢測器(ELSD)

  蒸發光散射檢測器(Evaporative Light-scattering Detector)是通用型質量檢測器,理論上所有的物質都能用ELSD檢測出來,但對色譜柱、流動相、化合物本身等有一定的要求。

  ELSD的基本原理可概括為3個過程:

  1、霧化:色譜柱流出液在載氣的作用下在霧化室內轉變成細小的液滴(氣溶膠)。

  2、蒸發:載氣把液滴從霧化室運送到漂移管進行蒸發,在漂移管中,溶劑完全被除去,留下微粒或純溶質的小滴。

  3、檢測:溶質顆粒(固體)從漂移管出來后進入光檢測池,穿過激光光束,即產生散射,再轉變成為信號。注意:由于溶劑在漂移管中完全蒸發,所以有很多氣態的溶劑被載氣帶入檢測器,但氣體經過光束時,不會影響光的穿透,即不會影響光的散射,不會產生任何信號,所以ELSD的信號中沒有溶劑峰。

  ELSD目前有兩種類型:1、讓全部色譜柱流出物都進入直的漂移管,流動相在其中蒸發;2、讓全部色譜柱流出物通過一個彎管,在此管中大的顆粒沉積下來流入廢氣管,其余的小顆粒進入螺旋狀的蒸發管。后一種類型的ELSD檢測到的樣品量其實比實際的要小,但液滴更均勻。現在有可以在一臺儀器上兩種類型互變的ELSD,可根據需要選擇。

  ELSD的主要影響因素:

  1、載氣:由于色譜柱流出液需要被霧化,且霧化后液滴的大小和均勻性是保證ELSD的靈敏度和重復性的重要因素,所以霧化氣流的純度和壓力(流速)會影響檢測器的信噪比。所用的載氣要求純度高,不含顆粒物等非揮發性的物質,當被測物容易被氧化時,不能使用空氣而要用氮氣做載氣;壓力也要適中;另外,溶質顆粒在進入光檢測池時被輔助載氣所包封,避免溶質在檢測池內的分散和沉淀在壁上,保證了檢測池的清潔。

  2、霧化溫度:ELSD通過對氣壓和溫度的精確控制,確保在霧化室內形成一個較窄的液滴尺寸分布,使液滴蒸發所需要的溫度大大降低,維持了顆粒的均勻性,在不使被測物質蒸發的前提下,溫度越高,流動相蒸發越完全,色譜圖基線越好、信噪比越高,但溫度太高會導致流動相沸騰,增加背景噪聲,溶質部分

  氣化,信號變小,降低信噪比。

  ELSD的優點:

  1、適用于檢測揮發性低于流動相的任何樣品,包括吸收、不產生熒光)的物質(如人參皂苷、黃芪甲苷、糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯及甾體等)。

  2、流動相低溫霧化和蒸發,對一些熱不穩定、半揮發性化合物,可以通過調節蒸發溫度來使比被測物質沸點低的組分蒸發,所以可以檢測部分熱不穩定或半揮發性的化合物。

  3、由于流動相和溶劑蒸發了,使用ELSD檢測器收集的色譜圖劑峰,而且梯度洗脫沒有折光視差效應(示差折光檢測器有),一般不會出現基線漂移。

  4、檢測光的散射變化,所有進入到散射池的物質都可被檢測,而且響應值只與物質的量(質量)有關。

  5、輔助載氣提高了檢測靈敏度,保持檢測池內的清潔,避免污染。

  6、高精度霧化和蒸發溫度控制,保證高精度檢測;

  7、可與任何HPLC、SFC(超臨界流體色譜)系統連接。

  ELSD的缺點:

  1、流動相要全部蒸發掉,所以冰醋酸、甲酸、TFA,氨水、三乙胺等)。

  2、如果被測物質沸點接近或低于流動相的蒸發溫度,則無法檢測。 3、濃度跟峰面積不成線性,分別取自然對數后成線性。

  4、需要配置高壓氮氣或空氣,使用不便,且實驗中產生廢氣有害。

  ELSD的靈敏度較紫外和熒光檢測器稍低,但比示差折光檢測器高,對溫度變化不敏感,基線穩定,適合與梯度洗脫液相色譜聯用。示差檢測器(RI)靈敏度低,與梯度脫洗不相容。質譜是另一種通用型檢測器,但它的費用昂貴、操作復雜。

  度范圍內,大致呈線性;而在較低濃度范圍內,則大致呈指數關系,即Y=aXb,

  其中的b值往往為1-2。這一點可能與液滴進入到漂移管后的現象有關,液滴進入到漂移管后有3個現象:1、易揮發的部分蒸發;2、一些顆粒落到漂移管的管壁上;3、一些顆粒凝結在一起。

  探討:

  ELSD很多人都說它重現性很差,其實我根據我自己的經驗,重現性差一般是指其峰面積重現性較差(和UV比較),但其色譜條件的重現性還是比較穩定的。至于標準曲線的做法,目前沒有定論到底以峰面積和濃度直接做線性還是用自然對數、常用對數。實驗時可先用峰面積和濃度直接做線性,如果相關系數不好,再嘗試用對數關系(自然對數或常用對數)。當對照品和供試品溶液接近時,可以考慮做一個比較窄的范圍做線性,如果直接用兩點法做計算的話,必須有數據支持。至于做隨行對照的問題,按正規要求,不只ELSD,其他檢測器的液相也應該這樣做,只是因為儀器相對的穩定性所以大家都不做,對于ELSD當然做隨行對照最好。蒸發溫度開始可以設高些,如果基線沒問題再慢慢調整到最佳溫度流速。ELSD為質量型檢測器,所以樣品的預處理就相對更重要些,盡可能地分離純化將會使你的方法學更容易建立,太多的成分在里面容易干擾正常檢測。

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